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Bst4.3 DNA聚合酶经酶电子重构架和进化筛选，为Bst 4.0的升级品，通用于以DNA或RNA为模板的LAMP或RT-LAMP扩增。

• Bst 4.3包含热启动Aptamer，该配体确保酶在<30℃时，酶活封闭效率>90%，在>60℃时1min内完全释放酶活。该特性利于室温建立反应体系，并大幅降低了低温条件下的非特异扩增；
  
• 反应温度提升到70℃，大幅降低引物Dimer的形成，提高扩增特异性，并使得粗样品核酸释放更加充分；
  
• 本制品添加了解旋酶，因此，允许在不使用F3/B3引物的情况下进行easy LAMP扩增，并允许FIP/BIP的引物用量降低一倍。这将进一步降低非特异扩增，并使得扩增均一性大幅提升。

• 热启动Bst4.3 DNA聚合酶(16U/μL)与10×IsoAmp Buffer 2均不含甘油，可用于冻干体系。
  
• 10×GuHCl为500mM，1×下50mM的GuHCl能显著加速LAMP扩增约3～4min，必要时还可以作为样本的裂解液。
  
• Bst4.3 DNA聚合酶在用于LAMP扩增时的推荐反应温度为70℃。由于解旋酶的反应温度为70℃，因此该酶在65℃扩增时，性能会大幅下降。
  
• 制品中包含高浓度的盐组分，使用时做好个人防护，防止制品与皮肤、眼、鼻、呼吸道等接触和吸入，一旦接触或吸入，请用大量的清水冲洗。
  
• 防止气溶胶污染，尽可能进行分区操作。
  
• Mg²⁺的使用浓度为4～10mM浓度，IsoBuffer中没有Mg²⁺，通常情况下，在6～8mM Mg²⁺条件下可获得较好的LAMP结果。
  
• dNTP推荐的使用浓度为1mM，必要条件下可在0.5～1.25mM间调整。
  
• 使用无模板DNA作为对照检测扩增的特异性。
  
• 未知的原因，在反应体系中加入30～50mM GuHCl，对多数引物来讲，可加速LAMP扩增3～5min，并提高LAMP检测灵敏度。但这不是绝对的，有些引物组具有相反的效应。

• 配制10×LAMP Primer Mix：
  

  引物	标准LAMP	eLAMP
  FIP/BIP	16μM each	8～16μM each
  LF/LB	4～8μM each	4～8μM each
  F3/B3	2μM each	非必须

  • eLAMP（easy LAMP）为去除F3/B3引物的方法，为Bst4.3专用的使用策略，对于大多数引物组，在解旋酶的加持下，扩增速度几乎不受影响。
• 配制LAMP反应体系：
  

  成分	用量
  热启动Bst4.3 DNA聚合酶(16U/μL)	0.5μL
  10×IsoAmp Buffer 2(Mg2+-free)	2.5μL
  10×GuHCl	2.5μL
  dNTP Mixture(10mM each)	2.5μL
  100mM Mg2+	1.5μL
  10×Primers	2.5μL
  模板DNA/RNA	10ng
  ddH2O	至25μL

  • 关于Bst酶的用量，对于绝大多数的LAMP扩增来讲，0.16～0.32U/μl的浓度，均可获得理想的扩增结果，必要条件下进行其它调整。
• 扩增反应：置于70℃反应20～40min。